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技術(shù)文章

細胞無血清培養(yǎng)基被廣泛應(yīng)用與哪些地方?如何使用?

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   細胞無血清培養(yǎng)基被廣泛的應(yīng)用于培養(yǎng)哺乳動物和無脊椎動物細胞以制備單克隆抗體,病毒抗原和重組蛋白等。大多數(shù)的無血清培養(yǎng)基含有向細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)節(jié)葡萄糖攝取量的胰島素,以及一些蛋白質(zhì)和清蛋白,纖維蛋白,胎球蛋白等,這些蛋白在細胞培養(yǎng)中發(fā)揮各種不同的功能,如提供細胞貼壁所需的基質(zhì),抗生物反應(yīng)器剪切力,作為脂質(zhì)和其他生長分化因子的載體等。
  無血清培養(yǎng)基應(yīng)用的優(yōu)點:
 ?。?)成分的限定性;
 ?。?)產(chǎn)品質(zhì)量一致性;
  (3)簡化生產(chǎn)過程;
 ?。?)易于控制培養(yǎng)環(huán)境;
 ?。?)細胞類型的優(yōu)化配方。
  無血清培養(yǎng)基應(yīng)用
  1、DC細胞、CIK細胞和NK細胞的長期增殖培養(yǎng)
  2、PBL細胞和TIL細胞的長期增殖培養(yǎng)
  3、單核細胞和巨噬細胞的長期增殖培養(yǎng)
  4、T淋巴細胞的長期增殖培養(yǎng)
  細胞無血清培養(yǎng)基使用方法
  1、采集與分離外周血采集外周血,F(xiàn)icoll密度梯度離心分離收集單個核細胞。
  2、單個核細胞的接種與誘導(dǎo)活化
  1)0d時,繃胞計數(shù)。按細胞密度2x106cell/mL接種至對應(yīng)體積的培養(yǎng)液中。添加誘導(dǎo)因子YC001一支。添加10%比例的自體血漿。
  2)1d時(24小時),添加誘導(dǎo)因子YC002、YC003、YC004至已經(jīng)接種細胞的培養(yǎng)液中。將YC005添加至未經(jīng)使用的培養(yǎng)基中,待用。
  3、細胞的連續(xù)培養(yǎng)與擴增
  1)3d時,補入新鮮培養(yǎng)液,調(diào)整細胞密度至(0.6-0.8)x106cell/mL。同時添加新加入培養(yǎng)液體積l10%比例的自體血漿。補液比例大致在1:2左右(原有培養(yǎng)液體積:新加培養(yǎng)液體積)
  2)5d時,補入新鮮培養(yǎng)液,調(diào)整細胞密度至(0.6-0.8)x106cell/mL。補液比例大致在1:3左右。
  3)7d時,補入新鮮培養(yǎng)液,調(diào)整細胞密度至(06-08)x106cell/mL。補液比例大致在1:2左右。
  4)9d時,將剩余培養(yǎng)液全部加入。
  4、收獲細胞
  培養(yǎng)周期結(jié)束后,依據(jù)細胞量收獲細胞。

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